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技術(shù)文章

冷凍干燥機(jī)在藍(lán)耳病病毒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中的應(yīng)用點(diǎn)擊次數(shù):1630 更新時(shí)間:2018-10-08

豬藍(lán)耳病又名豬流行性流產(chǎn)和呼吸綜合征,該病病原體為Lelysted病毒,呈卵形、有囊泡、直徑在40-60 nm之間,表面有約5 nm大小凸起,基因組為單股正鏈RNA病毒,該病毒PRRSV基因組具有較強(qiáng)的變異性,傳染性強(qiáng)具有地方流行性,我國將其列為二類傳染病,在防治該病的過程中首先需要快速診斷和檢測藍(lán)耳病病毒,在檢測藍(lán)耳病病毒時(shí)需要統(tǒng)yi的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

 

實(shí)驗(yàn)設(shè)備

冷凍干燥機(jī)FDU-1200

冷阱溫度-45 ℃

除濕量1 L

采用便捷式設(shè)計(jì)、可置于實(shí)驗(yàn)桌上,操作簡單可分別采用手動(dòng)和自動(dòng)運(yùn)行模式,方便科研人員開展大量的實(shí)驗(yàn)工作。

 

實(shí)驗(yàn)過程

將滅活后的病毒液制備藍(lán)耳病病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),將純化后的病毒進(jìn)行無菌檢測、外源性病毒檢測。

 

第二步

將凍干保護(hù)劑與藍(lán)耳病病毒液混合搖勻后,移液分裝至10支容量為3 mL的具十字橡膠塞的無菌瓶中(十字塞的十字部分插入瓶中,塞冒懸于瓶口),每支1 mL試樣。

 

圖片3.png

 

 

第三步

10支分裝好的試樣瓶置于-80 ℃的預(yù)凍30 min后取出,預(yù)凍后樣品瓶置于冷阱溫度已達(dá)-45 ℃的凍干倉中,運(yùn)行真空泵開始凍干,一直到樣品質(zhì)量不發(fā)生變化時(shí)凍干結(jié)束并在真空狀態(tài)下壓蓋密封十字橡膠塞,得到凍干后的樣品。

圖片4.png

 

第四步

采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測藍(lán)耳病病毒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性、穩(wěn)定性,得到藍(lán)耳病病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)也為該病毒定性和定量檢測提供標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

圖片5.png

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